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高中二年级生物

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  • 实验题
    下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果:
    培养基成分:NaNO3:2g;K2HPO4:1g;KCl:0.5g;MgSO4:0.5g;FeSO4:0.01g;蔗糖:30g;琼脂:15g~20g;蒸馏水:1000mL。
    A.实验目的:略。
    B.实验材料和用具:略。
    C.实验方法和步骤:
    (1)接种:
    ①接种前,准备好上述配方的培养基,放入培养皿中并灭菌,供实验用。
    ②取10g土壤,放在无菌研钵中,注入5mL蒸馏水,并用无菌玻璃棒搅拌均匀,备用。
    ③将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上,手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后,用接种环蘸取少许泥浆,轻轻地点接在培养基的表面上,共点接15~20处。
    ④接种后,轻轻地盖上培养皿盖,将培养皿放在实验桌上。
    (2)培养:将接过种的培养皿放人恒温箱内,在28℃~30℃的温度下培养3d~4d。
    (3)观察:3d~4d后,取出培养皿,仔细观察培养基上的菌落,其中大而扁、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的菌落为自生固氮菌。
    (4)镜检:略。该实验方案和观察结果中有几处明显错误,请指出错误并改正。(至少找出三处)
    本题信息:2011年同步题生物实验题难度极难 来源:姚瑶
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本试题 “下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果:培养基成分:NaNO3:2g;K2HPO4:1g;KCl:0.5g;MgSO4:0.5g;FeSO4:0.01g;蔗糖:30g;琼脂:15g~20...” 主要考查您对

土壤中微生物的分离与计数

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  • 土壤中微生物的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数:

1.分离菌株的思路
(1)自然界中目的菌株的筛选
①依据:根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
②实例:PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶,就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选
①原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度.pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理:培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法:能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基,能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2.统计菌落数目的方法
(1)稀释涂布平板法(间接)
①当样品的稀释庋足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数
3.分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌,若指示剂变红,可确定该种细菌能够分解尿素。
4.实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定


知识拓展:

1、Taq细菌是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求,加入某些物质或出去某些营养物质,一直其他微生物的生长,也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性,在培养基中加入某种化学物质,从而筛选出待定的微生物。这种培养基叫做选择培养基。
3、测定微生物数量的方法:
①直接计数法:常用显微镜直接技术法,一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
②间接计数法:常用稀释平板计数法,平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。4、通常用来作为菌种鉴定的重要依据的是菌落。
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