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高中二年级生物

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  • 探究题
    探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。
    实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
    材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干。无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。
    方法步骤:
    (1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在___________操作。
    (2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL,转至9mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰____cm处。
    (3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布____个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布____个平板。
    (4)培养。放入恒温箱内,在适宜温度条件下培养3d~4d。一般每隔____小时统计一次,选取____时的记录作为结果,这样可以防止____。
    (5)细菌的计数。当菌落数目稳定时,选取菌落数在___________的平板进行计数。如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌落数是___________。(稀释度是105)
    (6)预期结果。相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数____(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是______________。
    本题信息:2011年同步题生物探究题难度极难 来源:姚瑶
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本试题 “探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在...” 主要考查您对

土壤中微生物的分离与计数

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  • 土壤中微生物的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数:

1.分离菌株的思路
(1)自然界中目的菌株的筛选
①依据:根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
②实例:PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶,就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选
①原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度.pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理:培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法:能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基,能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2.统计菌落数目的方法
(1)稀释涂布平板法(间接)
①当样品的稀释庋足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数
3.分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌,若指示剂变红,可确定该种细菌能够分解尿素。
4.实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定


知识拓展:

1、Taq细菌是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求,加入某些物质或出去某些营养物质,一直其他微生物的生长,也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性,在培养基中加入某种化学物质,从而筛选出待定的微生物。这种培养基叫做选择培养基。
3、测定微生物数量的方法:
①直接计数法:常用显微镜直接技术法,一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
②间接计数法:常用稀释平板计数法,平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。4、通常用来作为菌种鉴定的重要依据的是菌落。
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