本试题 “既可用于基因重组技术又可用于细胞融合技术的是[ ]A.病毒B.纤维素酶C.聚乙二醇D.质粒” 主要考查您对DNA重组技术的基本工具
动物细胞的融合
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基因工程的别名 | 基因拼接技术或DNA重组技术 |
操作环境 | 生物体外 |
操作对象 | 基因 |
操作水平 | DNA分子水平 |
基本过程 | 剪切→拼接→导入→表达 |
结果 | 人类需要的基因产物 |
种类 | E·coli-DNA连接酶 | T4-DNA连接酶 |
来源 | 大肠杆菌 | T4噬菌体 |
功能特性 | 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来 | 缝合两种末端,但连接平末端之间的效率较低 |
相同点 | 都缝合磷酸二酯键,如图: |
知识点拨:
1、限制酶识别的序列的特点:呈现碱基互补对称,无论是奇数个碱基还是偶数个碱基,都可以找到一条中心轴线,如图,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如以中心线为轴,两侧碱基互补对称;以为轴,两侧碱基互补对称。
2、获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶,目的是产生相同的黏性末端。
3、获取一个目的基因需限制酶剪切两次,共产生 4个黏性末端或平末端。
4、限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性,以便于检测。
细胞工程 |
植物体细胞杂交 |
动物细胞融合 |
理论基础 |
细胞的全能性、细胞膜的流动性 |
细胞增殖、细胞膜的流动性 |
融合前处理 |
酶解法去除细胞壁 |
注射特定抗原,免疫处理正常小鼠 |
诱导手段 |
物理法:离心、振动、电激 |
物理法:离心、振动、电激 化学法:聚乙二醇 生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒) |
诱导过程 |
第一步:原生质体的制备(酶解法) 第二步:原生质体融合(物、化法) 第三步:杂种细胞的筛选和培养 第四步:杂种植株的诱导与鉴定 |
正常小鼠免疫处理动物细胞的融合 |
用途和意义 |
克服远缘杂交的不亲和障碍, |
(1)制备单克隆抗体 |
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